血管新生在冠心病、缺血性腦栓塞、骨折創傷、腫瘤及白內障等的治療、恢復和預后中具有重要意義。中醫治療缺血性疾病有著悠久的歷史,并取得了顯著的成效。麝香保心丸是中藥治療冠心病最具影響力的代表藥之一,經多年的臨床實踐證明,有顯著的抗心肌缺血作用。藥理研究發現,麝香保心丸具有擴張冠狀動脈1、保護血管內皮、抑制動脈粥樣硬化2以及減小心梗面積、預防心室重構等作用3。近年還使用不同方法對麝香保心丸進行系列研究,從分子水平、組織水平和解剖水平證實了它在體外和動物模型中的促血管新生作用。

血管生長因子的含量和表達

血管生長因子是調節內皮細胞和平滑肌細胞生長的重要因素。目前,眾多血管生長因子的研究結果顯示,血管內皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是最重要的生長因子,并已被用于促進血管新生的治療4,5。

汪珊珊等6在對培養的人臍靜脈內皮細胞研究中發現,麝香保心丸可促進VEGF和bFGF的mRNA表達,增加在培養上清液中的含量,這與生理鹽水組有顯著差異(P<0.01)。同樣,在對心肌梗死動物模型中,顯微鏡下可見麝香保心丸組VEGF和bFGF的陽性染色區域彌散分布于心肌細胞與間質中,染色程度與作為陽性對照的重組人堿性成評估細胞生長因子與肝素組無顯著差異,而生理鹽水組各因子的陽性染色面積較小(P<0.01),說明麝香保心丸可促進缺血心肌血管生長因子的表達(圖1)。

內皮細胞增殖及管腔結構形成實驗

血管新生是從血管內皮細胞受到刺激而增殖游走開始的。微血管在受到相關刺激后,血管內皮細胞的形態發生改變,細胞周期縮短。同時,內皮細胞開始增殖,在趨化因子和粘附分子的作用下出現游走及粘附,與周細胞合成新的基底膜并形成管腔,從而組成新毛細血管的基本結構。對內皮細胞增殖及管腔結構形成的評價,也是藥物促進血管新生的重要評價指標7。

在內皮細胞培養中6使用了牛腎上腺微血管內皮細胞。麝香保心丸可促進培養的牛腎上腺微血管內皮細胞增殖,表現出有一定的濃度依賴性趨勢,其大劑量組(40ml,即2g/L)的細胞數多于小劑量組(20ml,即1g/L),大劑量組和小劑量組的細胞數均明顯多于生理鹽水對照組(P<0.01)。顯微鏡下麝香保心丸組可見內皮細胞排列成管腔結構明顯增多(圖2)。進行統計分析后,各組的管腔結構數見表1。麝香保心丸促進培養的牛腎上腺微血管內皮細胞形成管腔結構,也表現出一定的濃度依賴性趨勢。該實驗結果提示,麝香保心丸可能通過促進微血管內皮細胞增殖并形成管腔結構來促進新生血管的形成。

雞胚絨毛尿囊膜模型

雞胚絨毛尿囊膜模型(CAM)是體外研究血管新生和抗血管新生最常用的方法之一。孵育過程中的受精雞蛋暴露于絨毛尿囊膜,在促血管新生藥物刺激72~96個小時后,受藥物刺激的實驗部位周圍可輻射狀生長出新生血管。以實驗部位邊緣1mm范圍內為一級血管,實驗部位邊緣5mm處為二級血管,對新生血管進行計數比較可用于促血管新生藥物的評價和篩選8,9。

CAM研究結果顯示6,濃度為50g/L的麝香保心丸10ml,可使CAM血管數比生理鹽水組明顯增加,血管分支增多,但較bFGF組要少。計數各處理組的一、二級血管數,并進行統計分析,結果說明麝香保心丸可促進血管新生(圖3)。

心肌梗死模型新生血管密度

在體外實驗證實了麝香保心丸的促血管新生作用后,王大英等10采用大鼠心肌梗死模型來評價麝香保心丸在活體動物模型中的作用。大鼠用鹽酸氯胺酮(80mg/kg)腹腔麻醉后,用呼吸機輔助呼吸,在肺動脈圓錐與左心耳交界稍下1~2mm處用無創縫線結扎左側冠狀動脈,開胸前后即時記錄Ⅱ導聯心電圖,以結扎部位下心肌變白、搏動減弱且心電圖出現ST段弓背向上明顯抬高為造模成功。在心梗造模后每天用麝香保心丸15mg/kg或生理鹽水灌胃2次,6周后處死動物,并留心臟標本。

該實驗結果顯示,麝香保心丸組可見較多微小血管均勻地分布在梗死邊緣區心肌組織,其促血管新生作用與陽性對照貝復劑肝素組相當,無顯著差異(P>0.05),血管面密度比假手術組和正常組高,而生理鹽水組僅見梗死邊緣區稀疏散在的微小血管,組間有顯著差異(P<0.01)。這一結果說明麝香保心丸可促進心梗后的代償性血管新生,并且血管新生的程度與劑量相關。手術本身對結果影響不大,因此排除了手術對血管新生的影響(圖4)。

韓麗華等11在建立大鼠心梗模型后,使用益氣活血方劑、麝香保心丸、生理鹽水灌胃6周后處死動物,取心肌組織用免疫組化法(CD34)測定心梗邊緣區新生血管數及微血管密度。結果發現麝香保心丸組對新生血管數及微血管密度的促進作用最強(P<0.05),對缺血心肌具有保護作用。

小 結

一系列研究結果表明,麝香保心丸具有較明顯的促血管生成活性,其機制可能與其能使內皮細胞表達VEGF和bFGF mRNA增高并使VEGF和bFGF釋放增多有關。麝香保心丸在體外可促進微血管內皮細胞增殖并形成管腔結構,以及能促進CAM的血管生成。動物模型的體內試驗結果顯示,麝香保心丸可促進心肌缺血部位的血管新生。上述實驗結果是對以往麝香保心丸藥理研究成果的重要補充,為其用于冠心病的治療提供了有利依據。血管生成治療對冠心病等缺血性疾病患者具有積極作用,而尋求促血管生成藥物和方法尤其是尋找適合外周給藥的有效藥物,無疑具有重要的意義。

參考文獻

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3.郝玉明,王風飛,劉素云.麝香保心丸對急性心肌梗塞患者的心肌保護作用.上海醫藥,1996,17(12):21-22.

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9.姜志鋼,鄂征.雞胚絨毛尿囊膜檢測腫瘤促血管生成作用改良技術方法.解剖學雜志,1989;12(2):142-143.

10.王大英,李勇,范維琥.麝香保心丸對心肌梗死大鼠梗死面積和血管新生的作用.中成藥,2004,26(11):912-915.

11.韓麗華,王振濤,索紅亮,等.益氣活血方促心梗后大鼠缺血心肌血管新生的實驗研究.河南中醫,2005,25(11):21-22.

表1各組管腔結構數目

組別 樣本數 管腔結構數(個/HP,×100)

麝香保心丸小劑量86.2±0.6*

麝香保心丸大劑量87.6±0.8**

生理鹽水83.3±0.4

注:與生理鹽水組比較:* P<0.05,** P<0.01

李勇,現任復旦大學醫學院內科學教授,華山醫院內科學(心血管病學)主任醫師,華山醫院心臟科副主任,心血管研究室主任,衛生部心血管疾病防治研究中心專家委員會委員,中華醫學會上海心血管委員會委員。

主要從事高血壓、冠心病和心力衰竭及中西醫結合的臨床診治和科研工作,參加國際多中心臨床試驗5項,承擔國家十五攻關項目、衛生部科研課題等,發表學術論文70余篇。